芽孢染色方法——你get到了嗎？
發(fā)布時(shí)間：2023-09-27 瀏覽次數(shù)：10271
通過前文《 一文帶您看懂革蘭氏染色》的學(xué)習(xí)，我們都知道，革蘭氏染色可以對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色，區(qū)別其為革蘭氏陽(yáng)性菌還是革蘭氏陰性菌。但對(duì)于帶有芽孢的細(xì)菌，在革蘭氏染色時(shí)，卻很難著色，如下圖，芽孢游離或位于細(xì)菌的一端，但均呈空心狀，未著色。
芽孢到底是個(gè)啥？
芽孢是某些芽孢桿菌屬、梭菌屬在其生活史后期形成的抗逆性極強(qiáng)的休眠體，呈圓形、橢圓形，壁厚，含水量極低，對(duì)熱、輻射、化學(xué)藥物有很強(qiáng)的抗性，因每一個(gè)營(yíng)養(yǎng)體細(xì)胞僅產(chǎn)生一個(gè)芽孢，所以芽孢無(wú)繁殖功能。細(xì)菌芽孢正因其特殊的結(jié)構(gòu)和生理過程，所以對(duì)各種殺菌處理有極強(qiáng)的抗性，常常導(dǎo)致熱殺菌食品腐敗變質(zhì)。
那么我們?nèi)绾螌⒀挎哌M(jìn)行染色，以便在顯微鏡下明確觀察到呢？
經(jīng)典芽孢染色法(Scharffer-Fulton)：
Step1：選取培養(yǎng)至合適時(shí)期的芽孢菌，在載玻片上進(jìn)行涂片，加熱固定；
Step2：滴加5%孔雀石綠，加熱染色5min，使冒蒸汽3-4次，切勿沸騰，中間適當(dāng)添加染料；
Step3：玻片冷卻后，水洗至流出液無(wú)色；
Step4：滴加0.5%沙黃復(fù)染液，染色1min；
Step5：水洗，干燥鏡檢。
染色后菌體為紅色，芽孢綠色。
此方法的優(yōu)點(diǎn)在于：孔雀綠染液對(duì)芽孢壁和細(xì)胞壁的著色能力很差，因此無(wú)需脫色，水洗就能洗去芽孢壁和細(xì)胞壁上粘附的染料，而進(jìn)入芽孢核心的部分卻不能被脫色。
了解了具體操作過程，操作過程中還需要加強(qiáng)注意哪些方面呢？
經(jīng)典芽孢染色法(Scharffer-Fulton)操作要點(diǎn)在于：
1、選取合適細(xì)菌生長(zhǎng)期的細(xì)胞，芽孢是產(chǎn)芽孢桿菌在一定培養(yǎng)條件或生長(zhǎng)階段下形成的，選取帶有芽孢、營(yíng)養(yǎng)菌體共存的菌體是本實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵。
2、熱固定溫度不宜過高，過高溫度（超200℃）會(huì)導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)體變形；
3、孔雀綠染液加熱充分，需要較高的熱度和較長(zhǎng)的時(shí)間，且不能沸騰，防止液體飛濺；
4、加熱過程不能干涸，需要中間添加染液，防止孔雀綠染色在玻片上干涸堆積，造成染色背景模糊，不易觀察。
以上就是芽孢染色的步驟和操作要點(diǎn)。怎么樣？講完了，您get到了嗎？
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