細胞傳代方法和注意事項
發(fā)布時間：2023-03-28 瀏覽次數(shù)：4018
傳代培養(yǎng)幾乎是所有細胞生物學實驗的基礎。當細胞在培養(yǎng)瓶中長到一定密度都會因為接觸抑制而停止生長，之后就需要將其稀釋分種成多瓶，細胞才能繼續(xù)生長。這一過程就叫傳代。傳代培養(yǎng)可獲得大量細胞供實驗所需，但培養(yǎng)皿中的細胞很容易受到外界污染，所有操作要在嚴格的無菌條件下進行。
今天為大家分享細胞傳代（以HEK-293T細胞傳代為例）的方法和注意事項。
實驗器材
材料：培養(yǎng)瓶/皿，離心管，移液管，移液器，廢液缸，75%酒精，所需培養(yǎng)細胞。
藥品：DMEM培養(yǎng)基，小牛血清或胎牛血清，0.25%胰蛋白酶，PBS緩沖液，青鏈霉素雙抗。
儀器：CO?培養(yǎng)箱，顯微鏡，超凈臺。
實驗步驟
以HEK-293T細胞傳代為例
1. 從培養(yǎng)箱拿出細胞，鏡下觀察細胞狀態(tài)，并判斷是否達到了可傳代的密度；
2. 回到超凈臺中，吸去培養(yǎng)基，加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞，吸去PBS，加入0.25%胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細胞；
3. 放入37℃培養(yǎng)箱，開始消化并計時，消化時間跟據(jù)細胞特性有所不同，例如HEK-293T細胞消化時間為2min；
4. 用含10%血清的DMEM培養(yǎng)基終止，通過反復吹打使細胞脫離培養(yǎng)皿底部，盡量呈單顆細胞的懸浮液（可以在顯微鏡下觀察）；
5. 收集細胞懸液離心，室溫下1200rpm，5min（不同細胞離心參數(shù)設置不同），離心完吸出上清丟棄（此時可以看到細胞在管底形成肉眼可見的細胞團塊，團塊大小與細胞多少有關，拿取過程中小心不要發(fā)生碰撞）；
6. 在新的培養(yǎng)皿種加入新鮮培養(yǎng)基，用新鮮培養(yǎng)基將細胞重懸，吹打幾下混勻細胞，將細胞接種到新培養(yǎng)皿，搖晃混勻；
7. 將培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱。
注意事項
1. 無菌操作規(guī)范：在實驗開始前和結束后，需要將超凈臺紫外照射滅菌30min，要穿好滅菌服，戴好滅菌手套和口罩。
2. 所有物品從外面移入超凈臺都需要噴灑75%酒精消毒，并且同樣用75%酒精消毒雙手。
3. 使用胰酶消化細胞要把握好時間，切勿消化過度，及時終止消化。如果消化不夠充分可以輕拍培養(yǎng)皿幫助細胞脫落。
4. 棄上清的動作需一次完成，切忌抬起管口，讓液體流回底部后，又再次傾倒?；亓鞯囊后w會把細胞團塊沖散甚至沖起來，再傾倒有把細胞團塊倒掉的風險。
5. 養(yǎng)成在培養(yǎng)皿上做標記的習慣，注明傳代時間，細胞種類。
來源：“Bioqure”公眾號
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