細(xì)胞完全培養(yǎng)基配置使用方法
發(fā)布時(shí)間：2023-06-30 瀏覽次數(shù)：16223
細(xì)胞培養(yǎng)體系一般由以下四種（三種）組成：
| 名稱 | 體積 | 保存條件 |
| 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 500mL | 4°C、避光 |
| 添加劑 | 5mL | -20°C、避光 |
| 胎牛血清(FBS) | 0-50mL | -20°C、避光 |
| 雙抗（青霉素/鏈霉素，P/S） | 5mL | -20°C、避光 |
添加劑和雙抗通常濃度為 100X（100 倍工作濃度）。血清的添加比例有 0%（不添加），1%（5mL）， 2%（10mL），5%（25mL），10%（50mL）幾種。【大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用的完全培養(yǎng)基配置方法為：450~500ml DMEM培養(yǎng)基+50ml FBS（胎牛血清）+5ml雙抗】
第一次使用時(shí)先將-20℃保存的添加劑、雙抗、FBS 轉(zhuǎn)移到 4℃溶解后，在滅菌后的百級(jí)潔凈等級(jí)環(huán)境中操 作，所使用的容器和移液耗材均需要進(jìn)行過(guò)無(wú)菌處理。
首先將解凍的 FBS、添加劑和雙抗進(jìn)行分裝，平均分裝成 5-10 份，留下本次配制所需要的量， 剩余的繼 續(xù)放回-20℃保存，之后按需取用融化后配制完全培養(yǎng)基，避免反復(fù)凍融。
建議用無(wú)菌的 50mL離心管 盛裝配置好的完全培養(yǎng)基
配制方法：在每個(gè) 50mL 離心管中加入①500uL 添加劑、②500uL 雙抗、③50×血清百分比 mL 的胎牛血清、④（50×（1-血清百分比）-1）mL 的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。配制完成后蓋上蓋子，顛倒混勻備用。
例如：在血清比例為 5%的條件下，50mL 離心管中各組分的體積分別為：
基礎(chǔ)培養(yǎng)基：（50×（1-5%）-1）=46.5mL+
添加劑：500uL +
雙抗：500uL+
血清：50×5%=2.5mL
配置好的培養(yǎng)基置于 4℃避光保存。由于添加劑中有很多重組蛋白，易發(fā)生降解，故配置好的完全培養(yǎng)基 有效期僅為 3-4 周，請(qǐng)盡快使用。因此建議每次配制 1-2 管（50-100mL），當(dāng)然使用量大的情況下也可以 適量增加配置量。
P. S.：不建議客戶將全部的血清、雙抗、添加劑直接加入基礎(chǔ)培養(yǎng)中混勻使用，原因如下：
1. 500mL 的基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積較大，灌裝時(shí)體積波動(dòng)很大，直接加入，無(wú)法準(zhǔn)確地控制因子和血清的工作 濃度。
2. 配制好的培養(yǎng)基僅能在 4℃保存 3-4 周，如果期間沒用完，繼續(xù)使用會(huì)影響培養(yǎng)效果。如果是-20℃保存，可以延長(zhǎng)保存時(shí)間，但是反復(fù)凍融也會(huì)影響完全培養(yǎng)基的效果。
3. 如果使用培養(yǎng)基時(shí)由于操作失誤導(dǎo)致污染，分裝能減少培養(yǎng)基的損失量。
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