常用細胞增殖與毒性檢?測方法介紹及其比較
發(fā)布時間：2023-03-14 瀏覽次數(shù)：2115
幾種細胞增殖與毒性檢測方法
01 MTT法
MTT：一種黃色染料，化學名：3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍。檢測原理 為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲臜(Formazan )并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞礬（DMSO）能溶解細胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。
優(yōu)點：靈敏度高、經(jīng)濟。
缺點：由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲臜產(chǎn)物不溶于水，需被溶解后才能檢測。這不僅使工作量增加，也會對實驗結(jié)果的準確性產(chǎn)生影響，而且溶解甲臜的有機溶劑對實驗者也有損害。
02 XTT法
XTT：化學名：2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide，作為線粒體脫氫酶的作用底物，被活細胞還原成水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物。當XTT與電子偶合劑（例如PMS )聯(lián)合應用時，其所產(chǎn)生的水溶性的甲產(chǎn)物的吸光度與活細胞的數(shù)量成正比。
優(yōu)點：
1. 使用方便，省去了洗滌細胞；
2. 檢測快速；
3. 靈敏度高，甚至可以測定較低細胞密度；
4. 重復性優(yōu)于MTT。
缺點：XTT水溶液不穩(wěn)定，需要低溫保存或現(xiàn)配現(xiàn)用。
03 WST-1法
WST-1是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成水溶性橙黃色的甲臜產(chǎn)物( Formazan )。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。WST-1是MTT的一種升級替代產(chǎn)品。
優(yōu)點：
1. 使用方便，省去了洗滌細胞，不需要放射性同位素和有機溶劑；
2. 比XTT和MTT更加穩(wěn)定，使實驗結(jié)果更加穩(wěn)定；
3. 與MTT、XTT等相比，線性范圍更寬，靈敏度更高。
04 CCK-8法
CCK- 8全稱為Cell Counting Kit-8，試劑中含有WST-8；化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯( 1-Methoxy PMS )的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物( Formazan )。生成的甲臜產(chǎn)物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。該方法已被廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞增殖試驗、細胞毒性試驗以及藥敏試驗等。
優(yōu)點：
1. 使用方便，省去了洗滌細胞，不需要放射性同位素和有機溶劑；
2. 檢測快速；
3. 靈敏度高，優(yōu)于WST-1；
4. 重復性優(yōu)于MTT；
5. 對細胞毒性??；
6. 試劑穩(wěn)定性很好，優(yōu)于WST-1；
7. 為1瓶溶液，毋需預制，即開即用。
缺點：
1. 與MTT相比，CCK-8和XTT的價格比較貴；
2. CCK-8試劑的顏色為淡紅色，與含酚紅的培養(yǎng)基顏色接近，不注意的話容易產(chǎn)生漏加或多加。
表1：幾種細胞增殖/毒性檢測方法的比較
| 檢測方法 | MTT法 | XTT法 | WST-1法 | CCK-8法 |
| 甲臜產(chǎn)物的 水溶性 | 差 （需加有機溶劑溶解 再檢測） | 好 | 好 | 好 |
| 適用細胞 | 貼壁 | 貼壁或懸浮 | 貼壁或懸浮 | 貼壁或懸浮 |
| 產(chǎn)品性狀 | 粉末 | 2瓶溶液 | 溶液 | 1瓶溶液 |
| 使用方法 | 現(xiàn)配現(xiàn)用 | 現(xiàn)配現(xiàn)用 | 即開即用 | 即開即用 |
| 檢測靈敏度 | 高 | 很高 | 很高 | 高 |
| 檢測時間 | 較長 | 較短 | 較短 | 最短 |
| 檢測波長 | 560-600nm | 420-480nm | 420-480nm | 430-490nm |
| 細胞毒性 | 高，細胞形態(tài)完全消失 | 很低，細胞形態(tài)不變 | 很低，細胞形態(tài)不變 | 很低，細胞形態(tài)不變 |
| 試劑穩(wěn)定性 | 一般 | 較差 | 一般 | 很好 |
| 批量樣品檢測 | 可以 | 非常適合 | 非常適合 | 非常適合 |
| 便捷程度 | 一般 | 便捷 | 便捷 | 非常便捷 |
普遍認為，CCK-8是操作更簡單、數(shù)據(jù)更穩(wěn)定、靈敏度也較高的細胞增殖與毒性檢測方法。CCK-8實驗過程簡單總結(jié)為配置細胞懸液、加入待測物質(zhì)、待測物質(zhì)與細胞共同孵育一定時間、加入CCK-8、測定吸光度五步。但其中仍有需要注意的地方，值得探討學習。
來源：“金沙生物”公眾號
說明：轉(zhuǎn)載只為分享目的，如有侵權(quán)請聯(lián)系刪除，謝謝！
