細胞空泡原因及解決方法
發(fā)布時間：2023-03-07 瀏覽次數(shù)：3919
許多科研的小伙伴在培養(yǎng)細胞過程中，可能會遇到細胞空泡化現(xiàn)象，那么細胞產(chǎn)生空泡原因是什么，如何避免細胞空泡化?
IM 空泡原因
細胞中的空泡一般指在光學(xué)顯微鏡下可見的，具有不同于細胞質(zhì)光學(xué)特征的泡狀物。細胞中形成空泡的過程和現(xiàn)象稱為空泡化?？张菘梢詠碓从诩毎麅?nèi)所有膜結(jié)構(gòu)的細胞器，如線粒體，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，溶酶體，高爾基體，自噬溶酶體等。
細胞出現(xiàn)空泡情況，可以從以下幾個方面分析原因。
細胞空泡原因
1.細胞老化：這是因為原代培養(yǎng)時細胞處于終末分化狀態(tài)，不會再分裂，如果培養(yǎng)時間過長細胞就會空泡化從而導(dǎo)致死亡。但傳代細胞出現(xiàn)這種狀況比較少見，如果出現(xiàn)，原因一般都是因為細胞傳代次數(shù)過多，嚴重老化。
解決方法：原代細胞使用較低代次進行實驗，傳代細胞避免傳代次數(shù)過高。
2.培養(yǎng)液錯誤配制：培養(yǎng)液配制錯誤、過期儲存、儲存不當(dāng)、血清質(zhì)量不合格等原因，引起培養(yǎng)液的滲透壓與PH值發(fā)生改變。
解決方法：更換新鮮培養(yǎng)液調(diào)整到合適的PH值，再進行培養(yǎng)。
注意培養(yǎng)液的正確配制與存儲方法。
使用質(zhì)量好和渠道正規(guī)的胎牛血清，因為這樣的血清營養(yǎng)豐富且外源刺激因子少，可以有效的避免出現(xiàn)這類問題。
3.細胞消化時操作不當(dāng)：胰酶消化時間過長導(dǎo)致細胞狀態(tài)受損，以及吹打時力氣過大產(chǎn)生的大量氣泡長期存在于培養(yǎng)液中也會導(dǎo)致細胞的空泡化。
解決方法：
選用合適的胰酶濃度和適當(dāng)?shù)南瘯r間進行消化。
在操作時避免吹打太過用力出現(xiàn)太多氣泡，如果出現(xiàn)了大量氣泡，可將氣泡去除后再培養(yǎng)。
4.沒有及時更換培養(yǎng)基：細胞在培養(yǎng)時會進行代謝，如果不及時換液細胞會因為營養(yǎng)物質(zhì)的不斷消耗、細胞代謝產(chǎn)物的積累從而使細胞缺乏營養(yǎng)，導(dǎo)致饑餓誘導(dǎo)形成自噬，從而產(chǎn)生空泡化，這種空泡在光學(xué)顯微鏡下是看不到的，只有在電鏡下才能觀察到。
解決方法：及時換液，通常2-3天需換液。
5.被污染
化學(xué)物質(zhì)：培養(yǎng)細胞時引入了一些各種自然或人工化合物等化學(xué)物質(zhì)，如弱堿胺類物質(zhì)導(dǎo)致的溶酶體的空泡化；MIPP， 一種查爾酮相關(guān)的分子，可以誘導(dǎo)大量的胞質(zhì)空泡，導(dǎo)致細胞出現(xiàn)相關(guān)巨泡式死亡的特征。
細菌、病毒：細菌和病毒的產(chǎn)物或者細菌病毒感染細胞后導(dǎo)致細胞狀態(tài)變差也會引起細胞空泡化，而其機制也各不相同。
解決方法
在細胞培養(yǎng)時提高無菌操作意識，操作規(guī)范，使用無菌試劑、耗材。
可定時通過PCR或市面上專用的檢測試劑盒來鑒定是否發(fā)生了污染，一旦發(fā)現(xiàn)立即做出處理，避免污染其他細胞。
總之，遇到細胞空泡化，我們可以根據(jù)不同原因，按照以下方法找到相應(yīng)解決辦法。
細胞空泡解決方法
1. 如果是因為細胞老化的原因，可以通過復(fù)蘇代數(shù)靠前的細胞進行培養(yǎng)。
2. 如果是培養(yǎng)液PH的問題，可以通過更換培養(yǎng)液調(diào)整到合適的PH值，再進行培養(yǎng)。
3. 在傳代時，要選用合適濃度的胰酶和選取適當(dāng)?shù)南瘯r間進行消化，在操作時避免吹打太過用力出現(xiàn)太多氣泡。
4. 要保證細胞培養(yǎng)所需的營養(yǎng)充足，可以通過增加血清濃度和在培養(yǎng)基中加入谷氨酰氨解決。
5. 盡量使用質(zhì)量好和渠道正規(guī)的胎牛血清，因為這樣的血清營養(yǎng)豐富且外源刺激因子少，可以有效的避免出現(xiàn)這類問題。
6. 在細胞培養(yǎng)時要嚴格進行無菌操作，操作時要規(guī)范，減少污染的可能性?？梢酝ㄟ^試劑盒檢測細胞是否污染，對于已經(jīng)污染的細胞滅菌后直接處理，避免污染其他細胞。
空泡化及其可逆性
胞質(zhì)空泡化可以是可逆的，也可以是不可逆的。可逆的胞質(zhì)空泡化通常只是在暴露于誘導(dǎo)劑后能觀察到，這種胞質(zhì)空泡化可以引起細胞狀態(tài)的改變或者細胞周期停滯。而不可逆的胞質(zhì)空泡化會導(dǎo)致細胞死亡，許多自然或者人工合成的化合物以及被細菌或者病毒感染后均會出現(xiàn)不可逆的胞質(zhì)空泡化，因此出現(xiàn)這種情況，細胞便不可再用于后續(xù)的實驗中。
來源：“IMMOCELL”公眾號
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