原代細(xì)胞分離培養(yǎng)及實例應(yīng)用
發(fā)布時間：2023-09-21 瀏覽次數(shù)：1074
凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細(xì)胞稱之為原代細(xì)胞。原代細(xì)胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細(xì)胞在體外進(jìn)行的首次培養(yǎng)，是建立細(xì)胞系的第一步，是一項基本技術(shù)。原代細(xì)胞最接近和最能反映體內(nèi)生長特性，適宜用于藥物敏感性試驗、細(xì)胞分化等實驗研究。
原代細(xì)胞的分離與培養(yǎng)方法：
1. 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶（或皿）中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
2. 消化培養(yǎng)法
組織消化法是把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和 非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀 變成 絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠 瓶中振蕩，使細(xì)胞團塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
3. 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
4. 器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
應(yīng)用實例
一.大鼠神經(jīng)元細(xì)胞（酶消化法）
簡述：新生24h或E18胎鼠，取腦，剝離海馬，剪碎，木瓜酶消化，清洗過篩后鋪于多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)板中。
二.大鼠雪旺細(xì)胞（植塊法）
簡述：新生24h大鼠，取坐骨神經(jīng)，剝?nèi)ネ饽ず褪?，剪?mm3的小塊，均勻鋪于培養(yǎng)皿內(nèi)，加少量血清，37℃ CO2培養(yǎng)2h后，再加入培養(yǎng)基，24-48h后有細(xì)胞爬出。
三.家兔陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞（消化后植塊法）
簡述：新鮮陰莖標(biāo)本立刻在0 ～4 ℃Hanks 緩沖液及含少量DMEM 的液體中清洗，鋒利刀片盡快切除皮膚、白膜、尿道及尿道海綿體等組織，將陰莖海綿體組織塊移入含 DMEM培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿，把組織塊切割成1 mm ×1 mm ×1 mm 碎屑塊， 并移入無菌錐型管，加入Hanks 緩沖液沖洗，去除粘附于組織塊上的細(xì)菌， 再以25 ml 37 ℃預(yù)熱的DMEM 培養(yǎng)液沖洗碎屑1 次。隨后將組織碎屑放入6 孔、35 mm 的 細(xì)胞培養(yǎng)皿， 每孔4 ～ 5 塊組織碎屑， 使組織塊貼壁， 每孔注入4 ml DMEM 培養(yǎng)液， 小心置入37 ℃、5 %CO2 、95 %空氣的細(xì)胞培養(yǎng)箱。一般2~3天就有細(xì)胞游離出來。
注意事項
1. 取材的組織要盡快培養(yǎng)。如若不能及時培養(yǎng)，可將組織浸泡于培養(yǎng)液內(nèi)，放置于冰浴或4℃冰箱中，如果組織塊很大，應(yīng)切成1cm3以下的小塊再低溫保存，但時間不能超過24h。
2. 從消化道、周圍有壞死組織等污染因素存在的區(qū)域取材，可用含500～1000u/ml的青-鏈霉素BSS液漂洗5～10min，或用10%達(dá)克寧注射液沖洗浸泡10min再作培養(yǎng)。
3. 組織塊不易貼壁，可預(yù)先在瓶壁涂薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。
4. 原代培養(yǎng)的1～2d內(nèi)要特別注意觀察是否有細(xì)菌、真菌、霉菌的污染，一旦發(fā)現(xiàn)，要及時清除。
原代細(xì)胞的應(yīng)用前景：原代細(xì)胞在細(xì)胞學(xué)研究、遺傳學(xué)研究、腫瘤研究、藥物篩選、細(xì)胞移植、類器官培養(yǎng)等眾多領(lǐng)域備受歡迎，且原代細(xì)胞在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用市場前景廣闊。
來源：“上海昆盟生物科技有限公司”公眾號，作者~Coweldgen ！
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