想要獲得優(yōu)質(zhì)細(xì)胞與有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)?從把細(xì)胞養(yǎng)好開(kāi)始！
發(fā)布時(shí)間：2022-08-10 瀏覽次數(shù)：2234
從基礎(chǔ)的細(xì)胞培養(yǎng)把關(guān)細(xì)胞質(zhì)量
細(xì)胞培養(yǎng)是所有實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，首先必須要有穩(wěn)定的培養(yǎng)狀況，才能區(qū)別、判定差異性，也才能將測(cè)試結(jié)果實(shí)際應(yīng)用到治療、制程等應(yīng)用層面。一般來(lái)說(shuō)，細(xì)胞培養(yǎng)所需的基本條件為氣體、溫度與培養(yǎng)基，前 2 者可由 CO?培養(yǎng)箱穩(wěn)定運(yùn)行，培養(yǎng)基的部分在大多時(shí)候是需要由操作者依據(jù)不同細(xì)胞株，以進(jìn)行半定制化，其中主要著重于下列幾項(xiàng)主要成份：
1. 5-20% 血清
細(xì)胞種類多元，一般難以將每種細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)進(jìn)行 100%解析，使用動(dòng)物血清進(jìn)行培養(yǎng)，是目前供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)豐富度的重要來(lái)源。血清中提供許多必須營(yíng)養(yǎng)素(Protein, Lipid etc.)，并且含有許多生長(zhǎng)因子和激素(Growth factors, Hormones)，能夠幫助細(xì)胞貼附、維持培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定(pH, Osmolality, surface tension, Viscosity)，更有助于提高生長(zhǎng)細(xì)胞數(shù)、增加存活率、延長(zhǎng)繼代數(shù)，以及使細(xì)胞型態(tài)與 Cell marker 表現(xiàn)穩(wěn)定。
2. 基礎(chǔ)培養(yǎng)基
隨多年的測(cè)試與研究發(fā)展，大部分已知且可自行制造的營(yíng)養(yǎng)物配方已經(jīng)發(fā)展成商業(yè)化的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，其中包含各種成分與比例的碳源(Glucose、Sodium Pyruvate)、胺基酸、維生素、無(wú)機(jī)鹽類。并且以不同緩沖效能的 buffer 為基底，其中添加 HEPES 與 Sodium Bicarbonate 中和CO? 溶于液體造成的酸性(低 pH 值)及緩沖 pH。
3. 抗生素
細(xì)胞由于沒(méi)有細(xì)胞壁，因此對(duì)于大部分的抗生素具有抵抗性。剛分離的細(xì)胞有潛在污染源或是怕環(huán)境、操作造成污染時(shí)，可以添加抗生素在培養(yǎng)基中做為預(yù)防性措施。一般針對(duì)細(xì)菌污染常用的是 penicillin/streptomycin 二合一混合液，若是對(duì)于真菌/酵母菌可以選用penicillin/streptomycin/amphotericin B 三合一混合液。
此外，細(xì)胞的最外圍僅有薄薄的細(xì)胞膜，因而是敏感且脆弱的，因此在備置細(xì)胞培養(yǎng)基或是會(huì)直接接觸細(xì)胞的溶液時(shí)，都會(huì)特別留意 pH 范圍應(yīng)介于 7.1-7.4、滲透壓(Osmolality)介于 310-340mOsm/kg，血紅素(Hemoglobin)會(huì)造成鉀離子濃度上升，改變細(xì)胞生理活性，如細(xì)胞內(nèi)外滲透壓、電解質(zhì)平衡、酸鹼平衡等，所以建議控制在≦10 mg/dL。其它象是內(nèi)毒素(Endotoxin)因?yàn)闀?huì)對(duì)細(xì)胞造成毒性、或可能造成不必要的細(xì)胞分化，一般也建議控制在≦10 EU/ml。
凍存流程控制以延續(xù)優(yōu)質(zhì)細(xì)胞
細(xì)胞冷凍是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的關(guān)鍵步驟，選擇合適的細(xì)胞狀態(tài)、收集細(xì)胞、確認(rèn)細(xì)胞質(zhì)量、到凍存液的選擇與冷凍品管理，都會(huì)影響細(xì)胞的活性及其表現(xiàn)。不當(dāng)?shù)睦鋬龊徒鈨霾襟E會(huì)降低細(xì)胞的存活率，更可能改變細(xì)胞特性，而使得試驗(yàn)前后無(wú)法連貫。
