實驗室微生物檢測過程注意事項
發(fā)布時間：2019-11-29 瀏覽次數：4037
一、培養(yǎng)基的滅菌及使用
（1）每次進行培養(yǎng)基配置時，要注意其生產日期是否在保質期內，查看其開瓶日期及瓶口密封性，保證其未變質，并且未吸潮。
（2）培養(yǎng)基配置時，稱量要準確，包括鹽水的分裝要準確。
（3）一定要保證現配制現滅菌，未滅菌的配好培養(yǎng)基不能長時間放置，更不可隔夜。
（4）培養(yǎng)基滅菌時要保證恒溫、恒壓，同時要保證有效滅菌時間。
（5）滅菌過的培養(yǎng)基要冰箱保存，可保存一周，一般不超過 3 天。而且要遵循“先入先出”原則，先配制的培養(yǎng)基要先使用。
（6）在使用時，要根據當班次的使用量，用水浴鍋先將培養(yǎng)基溶化為液態(tài)，然后及時調低水域溫度（先化好的可從水域取出，放在水浴鍋鍋蓋上）待用，千萬不可長時間使培養(yǎng)基處于高溫狀態(tài)。
（7）做產品微生物檢測時，傾倒培養(yǎng)基溫度在 45℃左右，不可過燙，避免將菌燙死；也不可過涼，化好的培養(yǎng)基又結塊凝固，不便于觀察結果。
（8）每瓶培養(yǎng)基均要做空白。
（9）盡量集中做樣，避免頻繁打開同一瓶培養(yǎng)基瓶塞，增大培養(yǎng)基的污染幾率，出現誤差結果。
（10）培養(yǎng)基剩余過少時，可先將其傾倒成空白用板。
二、 做樣環(huán)境的維持
（1）大環(huán)境（房間）
1）微生物檢測做樣時，窗戶和空調要關閉，或用酒精對房間進行噴霧消毒，避免房間內空氣流通影響安全柜內部環(huán)境（最好在有通排風系統(tǒng)的恒溫恒濕無菌間進行操作）。
2）如果在原來的原料微生物檢測室進行做樣，要定期開啟紫外燈，對房間進行殺菌。
（2）小環(huán)境（生物安全柜）
1）工作前準備
a. 首先微生物檢測實驗室生物安全柜打開紫外燈照射30分鐘
b. 關紫外燈，打開生物安全安全柜的日光燈和風機，用消毒劑對生物安全柜的內表面進行消毒擦拭
c. 將實驗中需要用到的物品集中用消毒劑擦拭后放在臺面相應位置上（切記勿阻擋風口?。?/p>
d. 等待5min，凈化工作區(qū)的空氣污染物
2）操作規(guī)范
a. 微生物檢測實驗過程中，雙臂垂直緩慢進入前面的開口，在生物安全柜中等待大約一分鐘，以使安全柜調整完畢后才可對物品進行處理。
b. 所有操作應在離前窗10cm以外的工作區(qū)進行。
c. 廢棄物應丟棄在生物安全柜內的處理容器中。
3）微生物檢測實驗操作時注意事項
a. 雙避免胳膊在前開口處快速移動和頻繁進出
b. 盡量避免污染的物品進入潔凈區(qū)
c. 避免使用明火干擾氣流，可使用微型電加熱器，最好使用一次性接種環(huán)。
d. 在生物安全柜內進行操作時，不能進行文字工作
e. 盡量減少操作者身后的人員活動。
4）工作結束后的要求
a. 將生物安全柜繼續(xù)運行至少3min來完成“凈化”過程
b. 將柜內物品移出前，應使用有效的消毒劑擦拭（特別是霉菌）
c. 每天實驗結束后，對生物安全柜的內壁和臺面進行擦拭
d. 等待5分鐘后，關閉前窗，關燈，關風機，紫外燈照射30分鐘
三、 工器具的潔凈度
（1）玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進行滅菌。
（2）做樣用剪刀、勺子等物品要做到做樣專用，不可與其它操作器具混用，使用時，先用75%酒精消毒，再采用灼燒方式進行滅菌。
（3）接種針（環(huán)）采用灼燒方式進行滅菌，但要注意做樣時要先將接種針（環(huán)）進行冷卻。
四、樣品的采集及微生物檢測
（1）保證采樣器具的無菌性
1）玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進行滅菌，保證恒溫、時間足夠（但不可時間過長，導致玻璃器皿易裂紋而報廢）。
2）取樣筐：使用前要用75%酒精進行噴灑消毒。
3）取樣勺：要保證其清潔消毒，清潔后用75%酒精進行擦拭消毒。
4）取樣袋：可先用酒精進行擦拭消毒，再在安全柜用紫外燈照射消毒，（包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒）。
5）電子稱表面用 75%酒精消毒。
（2）人員操作
1）保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。
2）取樣要具有代表性（隨機樣、目的樣、綜合樣）且要標示清楚。
3）取樣完畢，不可在車間逗留，要及時將樣品放入安全柜，對其外表面進行紫外燈照射消毒。
4）在要求的做樣區(qū)域進行操作。
5）做樣前，要用 75%酒精棉球對樣品袋口部進行擦拭消毒，再開口。
6）往鹽水瓶加樣品時，要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。
7）樣品計量要準確，稀釋倍數也要準確（1mL 吸管不允許將管口敲掉），進行 100 倍稀釋時，1mL 吸管要伸入鹽水中，不可以將樣品從管壁流下去，同時要避免將管底部捅破。
8）鹽水溫度以 40℃左右為宜，不能過熱，會將部分微生物燙死；也不能溫度太低，不能將樣品溶解完全。
9）進行稀釋時，要搖勻，保證溶液的均一性。
10）傾倒平皿時，要注意培養(yǎng)基瓶口不要接觸到平皿；傾倒的培養(yǎng)基要適量，不可以太少，在培養(yǎng)過程中干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右為宜。
11）做大腸菌群樣時，要提前將乳糖膽鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)管按需要量備好，放入安全柜對外表面進行紫外線滅菌。
12）接二步時，要注意先將接種針（環(huán)）進行冷卻，避免出現接不上菌落的情況發(fā)生，導致無法判斷、確認。
13）做樣完畢，及時放入相應培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)，并清理清潔安全柜。
五、 微生物的培養(yǎng)
（1）在培養(yǎng)過程中，要隨時監(jiān)控培養(yǎng)箱溫度，保證其在適宜的溫度進行培養(yǎng)。
（2）要按照《微生物檢驗規(guī)范》要求及時觀察結果，出現異常，要及時分析原因進行反饋。
