溶血性鏈球菌的檢驗(yàn)
發(fā)布時(shí)間：2019-09-02 瀏覽次數(shù)：18304
鏈球菌在自然界中分布較廣，存在于水、空氣、塵埃、糞便及健康人和動(dòng)物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通過(guò)直接接觸、空氣飛沫傳播或通過(guò)皮膚、粘膜傷口感染，也可通過(guò)被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品對(duì)人類進(jìn)行感染。
根據(jù)鏈球菌在血液培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖后是否溶血及其溶血性質(zhì)分為三類。
(1)α-溶血性鏈球菌(α-hemolytic streptococcus):菌落周圍有1-2mm寬的草綠色溶血環(huán)，環(huán)內(nèi)紅細(xì)胞未溶解，血紅蛋白變成綠色這類鏈球菌亦稱為草綠色鏈球菌，也稱甲型溶血。此類細(xì)菌致病力不強(qiáng)，多為條件致病菌。
(2)β-溶血性鏈球菌(β-hemolytic streptococcus):菌落周圍形成一個(gè)2-4mm寬、界限分明、完全透明的無(wú)色溶血環(huán)，也稱乙型溶血，因而這類菌亦稱為溶血性鏈球菌，該菌的致病力強(qiáng)，常引起人類和動(dòng)物的多種疾病。
(3)γ-溶血鏈球菌(γ-streptococcus):不產(chǎn)生溶血素，菌落周圍無(wú)溶血環(huán)，也稱為丙型或不溶血性鏈球菌(Streptococcus non-hemolytics)，該菌無(wú)致病性，常存在于乳類和糞便中，偶爾也引起感染。
α、β、γ溶血現(xiàn)象圖
在食品標(biāo)準(zhǔn)4789、公共場(chǎng)所標(biāo)準(zhǔn)18204以及衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)WS394都有對(duì)致病能力強(qiáng)的β-溶血性鏈球菌的相關(guān)檢驗(yàn)說(shuō)明。
標(biāo)準(zhǔn)4789.11-2014的檢驗(yàn)流程圖
溶血性鏈球菌在哥倫比亞CNA血瓊脂平板上的典型菌落形態(tài)為直徑約2mm～3mm，灰白色、半透明、光滑、表面突起、圓形、邊緣整齊，并產(chǎn)生β 型溶血。
乙型溶血性鏈球菌
鑒定溶血性鏈球菌一般要挑取平板上的典型菌落，首先接種哥倫比亞血瓊脂平板和TSB增菌液進(jìn)行分純培養(yǎng)，然后做革蘭氏染色以及觸酶實(shí)驗(yàn)。
檢測(cè)步驟一：革蘭氏染色鏡檢
挑取可疑菌落染色鏡檢。β型溶血性鏈球菌為革蘭氏染色陽(yáng)性，球形或卵圓形，常排列成短鏈狀。（老齡培養(yǎng)或被中性粒細(xì)胞吞噬后，會(huì)轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性。）
鏈球菌革蘭氏染色顯微鏡圖
檢測(cè)步驟二：觸酶試驗(yàn)
挑取可疑菌落于潔凈的載玻片上，滴加適量3%過(guò)氧化氫溶液，立即產(chǎn)生氣泡者為陽(yáng)性。β型溶血性鏈球菌觸酶為陰性。（鏈球菌與葡萄球菌不同，不產(chǎn)生過(guò)氧化氫酶）
左邊為過(guò)氧化氫陰性 右邊為過(guò)氧化氫陽(yáng)性
檢測(cè)步驟三：鏈激酶試驗(yàn)（選做項(xiàng)目）
這個(gè)實(shí)驗(yàn)所用的血必須是人血，用兔血或者羊血都是做不出來(lái)的。
健康人的血漿中含有一種酶原，稱為胞漿原。胞漿原在正常狀態(tài)下不活動(dòng)，如被溶血性鏈球菌產(chǎn)生的激活酶作用后，胞漿原即變?yōu)榛顒?dòng)性的胞漿素，能溶解纖維蛋白，能產(chǎn)生激活酶的鏈球菌主要有A,C,G等群。凝固塊重新完全溶解為陽(yáng)性，不溶解為陰性，β型溶血性鏈球菌為陽(yáng)性。
桿菌肽(bacitracin)敏感試驗(yàn)（4789.11-2003舊標(biāo)準(zhǔn)）
主要用于β型溶血性鏈球菌的A群與非A群鏈球菌的鑒別。此法可作為篩選試驗(yàn)。
操作步驟：0.04U桿菌肽藥敏紙片貼在涂布有待測(cè)菌的血瓊脂平板上，36℃培養(yǎng)18-24h后，觀察抑菌環(huán)以判斷是否為敏感。如有抑菌圈出現(xiàn)即為陽(yáng)性，用已知的陽(yáng)性菌株(ATCC32210)做對(duì)照。
左邊是鏈球菌C群無(wú)抑菌圈，
右邊是致病性溶血性鏈球菌A群有抑菌圈
